Chromatografie
Chromatografie chlorofylu
Úvod: Chromatografie je způsob odělování složek směsi na základě jejich rozdílné distribuce různých složek mezi pevnou a pohyblivou fází. Více o chromatografii zde, bod 5.
Pomůcky: Kádinka přiměřené velikosti, pevnou fázi (proužek filtračního papíru, Silufol), pipeta, špejle, kolíček na prádlo, (třecí miska s tloučkem)
Chemikálie: pohyblivá fáze (organické rozpouštědlo - methanol, ethanol...), listy rostliny (ideálně "tučnější" listy)
Postup přípravy vzorku:
- Vezmeme listy a nastříháme je na jemnější kousky
- Kousky vložíme do třecí misky a třeme je s trochou orchanického rozpouštědla
- Krok 2. lze přeskočit a jemně nastříhané listy lze vložit do uzaviratelné skleněné nádby s trochou rozpouštědla. V tomto případě je nutné nechat listy naložené minimálně 24 hodin
Postup samotné chromatografie:
- Vezmeme proužek filtračního papíru (popř. jinou pevnou fázi), do jehož spodní části (2 cm nad spodní okraj) vyznačíme tužkou (nikoliv prupiskou nebo fixem!) startovní čáru
- Na trartovní čáru naneseme 1-2 kapky rostlinného barviva rozpuštěného v rozpouštědle, který jsme připravili v předchozím odstavci
- Necháme vzorek zaschnout a vložíme jej do kádinky, na jejíž dně je malé množství rozpouštědla (pohyblivé fáze) tak, aby startovní čára nebyla ponořena (hladina rozpouštědla kolem 1 cm)
- Filtrační papír můžeme připevnit pomocí špejle položené vodorovně na okrajích kádinky a kolíčku, kterým je papír přichycen ke špejli
- Pozorujeme
Závěr: Barviva obsažená v listech jsou závislá na mnoha faktorech (druh rostily, roční období, onemocnění rostliny...) a pomocí chromatografie lze zjistit, jaká jsou v listech akuálně obsažena. Při lepším laboratorním vybyvení jsme schopni zjistit i přesná poměrová zastoupení těchto barviv.
Chromatografii lze provézt i při použtí barviva z fixu...
Bezpečností upozornění:
Methanol: v případě, že pracujete s methanolem, dbejte zvýšené opatrnosti, methanol je toxická látka. Dbejte, aby methanol nepřišel do styku s ohněm nebo topnými tělesy, je vysoce hořlavý.
Ethanol: při práci dbeje, aby nepřišel do kontaktu s ohněm nebo s topnými tělesy, ethanol je vysoce hořlavý.